产品描述

Nexturastat A 是一种强效的选择性的HDAC抑制剂，IC50为5 nM,其选择性高于其他的HDACs190倍。

靶点（IC50 & Targe）

HDAC6,5nM

体外研究

在B16鼠黑色素瘤细胞中，Nexturastat A引起乙酰化的α-微管蛋白水平剂量依赖性增高，不增加组蛋白H3乙酰化伴随的脓肿。此外，Nexturastat A显著抑制B16鼠黑色素瘤细胞的生长，GI50为14.3 μM。[1]

激酶实验

HDAC抑制试验:采用Reaction Biology Corp的测试方法来做HDAC抑制实验。使用杆状病毒表达系统Sf9细胞中离体的人类重组全长HDAC1和HDAC6。用来自P53蛋白379-382位点的荧光标记的乙酰化的RHKKAc作为底物。反应缓冲液包括50 mM Tris-HCl pH 8.0，127 mM NaCl，2.7 mM KCl，1 mM MgCl2，1 毫克/毫升BSA，终浓度为1% DMSO。化合物在DMSO中溶解，转移到酶化合物中，预培养5-10分钟，随后加入在30°C 下培养2小时。Trichostatin A 和显影液加入到缓冲液中终止反应，产生荧光。剂量-反应曲线是用30 μM化合物用3倍的稀释比例，产生10个数据点。IC50值通过这些数据计算，以两次实验的平均值±标准差的形式呈现。

细胞实验

Cell lines: B16小鼠黑色素瘤细胞

Concentrations: ~100 μM

Incubation Time: 48小时

Method:B16鼠黑色素瘤细胞以5000个每孔的密度接种于96孔板中。第二天，改变培养基，用含有不同浓度的HDACi或者对应DMSO载体浓度在完全培养基中稀释，一式三份。细胞在37摄氏度，5% CO2下培养48小时。活细胞数量通过 MTS assay按照说明书进行定量。20μL反应液加入到孔板中，37摄氏度孵育3小时。以690nM为背景，测定490nM处的吸光值。所有的数据都均一化，并且用对照组（对照组为100%）的百分数的形式呈现。

(Only for Reference)

参考文献

[1] Bergman JA, et al. J Med Chem. 2012, 55(22), 9891-9899.