试剂仪器设备原料
银牌会员第4
访问量: 617169   网址: hydranal.cnreagent.com    在线留言 
产品搜索
检测试剂盒 >> 生化试剂盒
ATP-柠檬酸裂解酶(ACL)测试盒(紫外分光光度法)
ATP-柠檬酸裂解酶(ACL)测试盒(紫外分光光度法)图片
货号: ACL-2-Y
包装: 50管/48样
索取资料及报价
货号:ACL-2-Y
产品介绍

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

ACL(EC4.1.3.8)是脂肪酸合成中的关键酶,其催化产生的乙酰辅酶 A 可用于脂肪酸合成和碳链延长、黄酮类物质合成、氨基酸合成等。

测定原理:

ACL 在 ATP 和辅酶 A 存在的情况下催化柠檬酸裂解为乙酰辅酶 A、草酰乙酸、腺苷二磷酸和磷酸盐。苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和 NADH 生成苹果酸和 NAD+,在 340nm 测 定 NADH 减少速率,计算 ACL 活性。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水

试剂组成和配制:

提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;

试剂一:液体 20mL×1 瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃保存;

试剂三:液体 2μL×1 支,4℃保存;

样本的前处理:

1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提 取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织, 加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

3、血清(浆)样品:直接检测。

测定步骤:

1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。

2、 样本测定

(1)工作液的配置,将试剂二和试剂三转移至试剂一中,充分混合溶解,置于 37℃(哺乳 动物)或 25℃(其它物种)水浴 5min;(注意:可取少量试剂一至试剂二和试剂三中,充 分混匀溶解后转移至试剂一瓶中,重复 2-3 遍);用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复 冻融。

(2)在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本和 190μL 工作液,混匀,立即记录 340nm 处 20s 时的吸光值 A1 和 2min20s 后的吸光值 A2,计算 ΔA=A1-A2。

ACL 活性计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、血清(浆)ACL 活力计算

单位定义:每毫升血清(浆)每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

ACL(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样÷T=1608×ΔA

2、组织、细菌或细胞中 ACL 活力计算

(1)按样本蛋白浓度计算

单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

ACL(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算

单位定义:每 g 组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

ACL(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V 样÷V 样总)÷T=1608×ΔA÷W

(3)按细菌或细胞密度计算:

单位定义:每 1 万个细胞每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

ACL(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=3.216×ΔA

V 反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d: 比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.01 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T: 反应时间,2 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总 数,500 万。

b.用 96 孔板测定的计算公式如下

1、血清(浆)ACL 活力计算

单位定义:每毫升血清(浆)每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

ACL(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样÷T=3216×ΔA

2、组织、细菌或细胞中 ACL 活力计算

(1)按样本蛋白浓度计算

单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

ACL(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=3216×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算

单位定义:每 g 组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

ACL(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W× V 样÷V 样总)÷T=3216×ΔA÷W

(3)按细菌或细胞密度计算:

单位定义:每 1 万个细胞每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

ACL(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=6.432×ΔA

V 反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:

96 孔板光径,0.5cm;V 样:加入样本体积,0.01 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T: 反应时间,2 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总 数,500 万。

相关产品
我要咨询 关闭
  •      
  • 姓名* 
  • 电话* 
  • 单位* 
  • email 
  • 留言内容*
  • 验证码*  
  • 让更多商家关注