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Western常见细胞裂解方法
2022.07.26   点击76次

Western常见细胞裂解方法:

1、使用除垢剂

除垢剂可以溶解易破裂的细胞,如血细胞、组织培养细胞等。NP-40等非离子型除垢剂温和且不变性,但溶解疏水蛋白能力较低。CHAPS等两性离子除垢剂和SDS等离子除垢剂可有效增加蛋白溶解性,并使蛋白变性。

2、机械方法

使用匀浆器、超声波仪或组织研磨使细胞受力破碎。超声处理等直接接触方法会产生热量,从而使样品过热,需使用冷却方法以避免样品过热。在超声处理期间,可将样品浸入冰浴;使用研钵和研杵研磨样品时,可以添加液氮保持样品低温。实际上通常会同时使用化学破碎法和机械法来最大限度释放样品中的蛋白质。

3、酶处理法

使用可消化植物或细菌细胞壁的酶对细胞进行裂解处理。例如纤维素酶和果胶酶(植物细胞)、裂解酶(酵母细胞),溶菌酶(细菌)。酶处理之后通常会使用另一种破碎方法如超声继续处理。

样品类与细胞破碎方法选择:

方法样品
细菌酵母/藻类/真菌种子绿色植物软组织哺乳动物细胞
温和方法渗透裂解-----
冻融裂解-----
酶解---
强力方法超声处理---
高压破碎---
研磨-
机械匀浆----
玻璃珠匀浆---
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