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土壤谷氨酰胺酶(S-GLS)活性检测试剂盒(微量法)
土壤谷氨酰胺酶(S-GLS)活性检测试剂盒(微量法)图片
包装: 100T/48S
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产品介绍

S-GLS(EC 3.5.1.2)存在于某些细菌以及植物根中,催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨,在氮素代谢中具有重要调控作用,尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。

S-GLS催化谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨,利用靛酚蓝比色法测定氨增加的速率,即可计算其酶活性。

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品组成:

试剂名称规格保存条件
试剂一液体30ml×1瓶4℃
试剂二粉剂×1瓶4℃
试剂三A液液体0.4ml×1支4℃
试剂三B液液体1.6ml×1瓶4℃
试剂四液体2ml×1瓶常温
标准品液体1ml×1支4℃

溶液的配制:

1.试剂二:临用前加入15ml蒸馏水备用。

2.试剂三:临用前将试剂三A倒入试剂三B中混匀备用(A:B=1:4比例配制)。

3.标准品:10μmol/ml氮标准液。将标准溶液用蒸馏水稀释64倍得0.156μmol/ml的标准溶液。

需自备的仪器和用品:

台式离心机、可见分光光度计/匀浆器、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、30~50目筛、研钵、甲苯、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干,过30~50目筛。

二、测定步骤

1.分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至630nm,分光光度计蒸馏水调零。

2.样本测定(在EP管中加入下列试剂)

试剂名称测定管对照管标准管空白管
风干土样(g)0.050.05--
甲苯(μL)2525--
常温静置10min。



试剂一(μL)275275--
试剂二(μL)200-

蒸馏水(μL)

-200
80
混匀,37℃水浴1小时。10000g常温离心10min,取上清液于96孔板或者1.5mlEP管中。
上清液8080--
标准液--80-
试剂三16161616
试剂四12121212
蒸馏水92929292

混匀,室温放置30min,630nm处读取吸光值A,分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管,计算ΔA=A测定管-A对照管,ΔA标准=A标准管-A空白管。

三、酶活性计算

单位定义:37℃下每 g土壤每天催化谷氨酰胺生成 1μmol氨定义为一个酶活力单位。

S-GLS(U/g土样)=ΔA÷(ΔA标准÷C标准)×V酶促÷W÷T=1.872×ΔA÷ΔA标准÷W

V酶促:酶促反应总体积,0.5ml;T:反应时间,1/24d;W:土壤质量,g;C标准:标准液浓度,0.156μmol/ml。

注意事项:

1.当测定吸光值大于 0.8时,建议将上清液用蒸馏水进一步稀释后测量。

2.离心后若上清液仍含有少量杂质,可将上清液再次 10000g,常温离心 10min去除。

3.试剂三配置后尽快使用,若发现变色则不能再用。

实验实例:

1.取两管 0.05g三叶草土,即为测定管和对照管,按照测定步骤操作,记为 A测定管、A对照管。用 96孔板测得计算ΔA=A测定管-A对照管=0.8-0.175=0.625,ΔA标准=A标准管-A空白管=0.268-0.044=0.224,计算酶活得:S-GLS(U/g土样)=1.872×ΔA÷ΔA标准÷W=1.872×0.625÷0.224÷0.05=104.46 U/g土样。

2.取两管 0.05g林土样即为测定管和对照管,按照测定步骤操作,记为 A测定管、A对照管。用 96孔板测得计算ΔA=A测定管-A对照管=0.466-0.164=0.302,ΔA标准=A标准管-A空白管=0.268-0.044=0.224,计算酶活得:S-GLS(U/g土样)=1.872×ΔA÷ΔA标准÷W=1.872×0.302÷0.224÷0.05=50.477 U/g土样。

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