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天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒(赖氏微板法)
天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒(赖氏微板法)图片
包装: 100T
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产品介绍

转氨酶是催化α -氨基酸和α -酮酸之间氨基转换反应的一组酶,天门冬氨酸氨基转移酶(AST)旧称谷草转氨酶 (GOT)主要存在于心肌、骨骼肌、肝脏,以心肌含量最高,肝脏次之,AST能够催化天门冬氨酸和a-酮戊二酸的氨基转移作用,形成谷氨酸和草酰乙酸。

天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒(赖氏微板法)其检测原理是天门冬氨酸氨基转移酶(AST)催化天门冬氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移反应,在ALT催化下,其反应公式如下:L-天门冬氨酸+α-酮戊二酸→草酰乙酸+L-谷氨酸。

二硝基苯肼与α-酮酸反应生成相应的二硝基苯腙,在碱性条件下二硝基苯腙的吸收光谱有差异,通过分光光度计检测在500~520nm处差异最大,以等摩尔浓度计算出丙酮酸的生成量,进而计算酶的活性。100T该试剂盒可检测50个样品(不含标准品),该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

产品组成:

产品名称100T保存条件
试剂(A):丙酮酸标准22mg室温
试剂(B):丙酮酸标准稀释液5ml室温
试剂(C):标准对照液2ml2-8℃
试剂(D): AST Assay buffer3ml2-8℃,避光
试剂(E):二硝基苯肼显色液3ml2-8℃,避光
试剂(F): AST显色基液25ml室温

自备材料:

1.蒸馏水

2.离心管

3.水浴锅或恒温箱

4.96孔板、酶标仪

操作步骤 (仅供参考) :

1.准备样品:

①血浆、血清样品:血浆、血清按照常规方法制备,可以直接用于本试剂盒的测定,-20℃保存1个月有效,用于AST/GOT的检测。

②细胞或组织样品:取恰当细胞或组织进行匀浆,低速离心取上清,-20℃保存1个月有效,用于AST/GOT的检测。

③(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度,以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的AST/GOT含量。

2.制作AST标准曲线:取丙酮酸标准1支,准确加入丙酮酸标准稀释液1ml,充分混匀,即配制成丙酮酸标准(100mmol/L),4保存备用。临用前,取适量的丙酮酸标准(100mmol/L),按丙酮酸标准(100mmol/L):丙酮酸标准稀释液=1:49的比例混合,即为丙酮酸标准工作液-丙酮酸标准(2mmol/L),按下表制备标准曲线。**设定平行检测管,求平均值。

加入物(μ l)01234
丙酮酸标准(2mmol/L)02468
标准对照液44444
AST Assay buffer(37℃提前孵育5min)2018161412
相当于AST/GOT(卡门单位)02461114190

混匀,向各管中加入二硝基苯肼显色液20μL,37℃孵育20min后加入AST显色基液200μL,混匀。室温放置5min,以蒸馏水调零,酶标仪测定505nm处各孔的吸光度。各孔的吸光度均减去”0”号孔的吸光度,所得吸光度的差值(纵坐标)与对应的卡门酶活力单位(横坐标)作图。

3.AST酶促反应:按照下表设置对照管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡。如果样品中的酶活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

加入物(μL)对照孔测定孔
待测样品(如血清等)44
AST Assay buffer(37℃提前孵育5min)-20
混匀,37℃水浴孵育60min。

AST Assay buffer(37℃提前孵育5min)20-
二硝基苯肼显色液2020
混匀,37℃水浴孵育20min。

AST显色基液200200

4.AST测定:混匀,室温放置5min,以蒸馏水调零,酶标仪505nm处测定对照孔、测定孔的吸光度(即为A对照、A测定)。

计算:以标准活力单位(24、61、114、190)为横坐标,以对应的吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,测定管的吸光度减去对照管的吸光度的差值(即A测定-A对照),从标准曲线查得AST活力单位。

参考范围:

成年健康人血清AST:8-28卡门单位/ml

注意事项:

1.二硝基苯肼显色液溶解以后,如果仍然有结晶析出,应弃用。

2.由于赖氏法的特点,在绘制标准曲线时每个点**做3孔的重复测定,求出各标准管的吸光度均值,减去“0”号管吸光度均值后,对照赖氏单位绘制标准曲线。

3.血清中AST活性在室温可以保存2天,4℃保存1周,-20℃保存1个月。

4.成批样品测定时,一般无需每份样本都做自身血清对照,以试剂空白管代替即可。

5.对于超过正常范围的血清样品,应该进行复测,复测时每份样本都应做自身血清对照。

6.严重黄疸、脂血或溶血的血清,可能会引起测定管吸光度增高,因此检测该类样品时应做自身血清标本对照。

7.当样品的酶活力大于190卡门单位时,应将样本进行5~10倍稀释后再行测定。

8.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期:

6个月有效。4℃运输,4℃保存。

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