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共价结合型果胶(CSP)含量检测试剂盒(可见分光光度法)
共价结合型果胶(CSP)含量检测试剂盒(可见分光光度法)图片
包装: 50T/24S
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产品介绍

注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

果胶(Pectin)是构成细胞初生壁和中胶层的主要成分,对细胞起着软化和黏合作用。果胶间以Ca2+桥及其他离子键、氢键、糖苷键、酯键和苯环偶联的方式交联,通过不同的抽提方法可以提取各种形式的果胶,如水溶性果胶(WSP)、离子结合型果胶(ISP)和共价结合果胶(CSP)。

利用带有螯合剂的碱溶液提取共价结合型果胶(CSP),其在酸性条件下水解生成半乳糖醛酸,后者在硫酸溶液中与咔唑进行缩合反应形成紫红色的化合物,生成物质在530nm处有最大吸收峰。

产品内容:

提取液一:80%乙醇,自备。即将80ml无水乙醇和20ml蒸馏水混合。

提取液二:液体30ml× 1瓶,4℃保存。

提取液三:液体50ml× 1瓶,4℃保存。

试剂一:浓硫酸60ml,自备。

试剂二:液体3ml×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体5ml× 1瓶,4℃保存。

标准品:粉剂×1支,10mg半乳糖醛酸,4℃保存。临用前加入0.943ml提取液三,配成50μmol/ml的标准液。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、1ml玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、丙酮、浓硫酸、无水乙醇和蒸馏水。

操作步骤:

一、共价结合型果胶的提取:

取约0.1g样本,加入1ml提取液一,室温快速匀浆,95℃水浴20min,冷却至室温,4000g 25℃离心10min,弃上清。沉淀加入1.5ml提取液一和丙酮交替各洗2遍(涡旋振荡2min左右,4000g 25℃离心10min,弃上清即可),沉淀即为粗细胞壁,加入1ml提取液二(去除淀粉)浸泡15小时,4000g 25℃离心10min,弃上清,加入1ml提取液三,充分匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清液待测。

二、测定步骤:

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至530nm,蒸馏水调零。

2、将50μmol/ml标准液用提取液三稀释为0.7、0.6、0.5、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025μmol/ml的标准溶液备用。

3、操作表:

试剂名称(μL)空白管标准管对照管测定管
样本--100100
标准品-100--
蒸馏水100---
试剂一800800800800
混匀、90℃放置10min,取出后冷却
试剂二--100-
试剂三100100-100
混匀,25℃静置30min后测定530nm处吸光值,分别记为A空白管、A标准管、A对照管和A测定管。△A标准=A标准管-A空白管,△A测定=A测定管-A对照管。

三、共价结合型果胶含量的计算:

1、标准曲线的绘制:以各个标准溶液的浓度为x轴,其对应的△A标准为y轴,绘制标准曲线,得到标准方程y=kx+b,将△A测定带入方程得到x(μmol/ml)

2、共价结合型果胶含量的计算:

共价结合型果胶含量(μmol/g鲜重)= x×V提取液三÷W =x÷W

V提取液三:加入提取液三的体积,1ml;W:样本鲜重,g。

注意事项:

1、浓硫酸具有强腐蚀性,操作时需特别注意,90℃加热取出后冷却再打开盖子,以防液体飞溅烧伤。

2、若△A超过0.6,可将样本用提取液三进行适当稀释再进行测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。

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