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谷氨酸(Glu)含量检测试剂盒(微量法)
谷氨酸(Glu)含量检测试剂盒(微量法)图片
包装: 100管/96样
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产品介绍

Glu广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,不仅是组成蛋白质的20种氨基酸之一,而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成,是生物体内主要氨基来源之一。此外,Glu还是味精的主要有效成分,常用做食品添加剂以及香料生产。

谷氨酸脱氢酶(GDH)催化谷氨酸和NAD生成α-酮戊二酸、NADH和NH4+,引起340nm处吸光度的上升,通过测定340nm吸光度的变化,计算谷氨酸含量。

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品内容:

试剂名称规格保存条件
试剂一液体60ml×2瓶2-8℃
试剂二液体2ml×1瓶2-8℃
试剂三粉剂×1瓶-20℃
试剂四粉剂×1支-20℃
标准液液体0.5ml×1支2-8℃

溶液的配制:

1.试剂三:临用前加入20ml试剂一;

2.试剂四:临用前加入1.5ml试剂二;

3.标准液:10μmol/ml谷氨酸标准品。

技术指标:

最低检出限:0.0037μmol/ml

线性范围:0.0125-0.2μmol/ml

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵、冰、蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

细菌、细胞或组织样品:收集细胞或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每500万细菌或细胞加入1ml试剂一,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3s,间隔10s,重复30次),10000rpm,常温离心10min,取上清待测。

称取约0.1g组织,加入1ml试剂一进行冰浴匀浆,10000rpm,常温离心10min,取上清待测。

二、测定步骤

1.分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2.标准溶液的制备 :将标准品分别稀释为0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125μmol/ml的标准溶液。

3.在有盖EP管中加入下列试剂:

(1)标准管:在微量石英比色皿/96孔UV板中加入40μL标准溶液、160μL试剂三和10μL试剂四混匀,立即记录340nm处20s时的吸光值为A1和5min20s时的吸光值A2,计算∆A=A2-A1。

(2)测定管:在微量石英比色皿/96孔UV板中加入40μL样本、160μL试剂三和10μL试剂四混匀,立即记录340nm处20s时的吸光值为A1和5min20s时的吸光值A2,计算∆A=A2-A1。

三、谷氨酸含量计算:

1.标准曲线的绘制:以谷氨酸含量(μmol/ml)为x轴,标准管∆A为y轴,绘制标准曲线y=kx+b。将测定管∆A带入方程得到x值

(μmol/ml)。

2.氨基酸含量计算:

(1)按照蛋白浓度计算:谷氨酸含量(μmol/mg)=x×V样本÷(Cpr×V样本)=x÷Cpr

(2)按照样品鲜重计算:谷氨酸含量(μmol/g质量)=x×V样本÷(W÷V样总×V样本)=x÷W

(3)按照细菌或细胞数量计算:谷氨酸含量(μmol/104 cell)=x×V样本÷(1000÷V样总×V样本)=0.001x。

V样总:加入提取液体积,1ml;V样本:加入的样本体积,0.04ml;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本鲜重,g;1000:细菌或细胞总数,1000万。

注意事项:

如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。

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