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亚铁氧化酶(HP)测试盒(可见分光光度法)
亚铁氧化酶(HP)测试盒(可见分光光度法)图片
货号: HP-2-Y
包装: 50管/24样
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货号:HP-2-Y
产品介绍

正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

HepHaestin (HP)作为铜蓝蛋白的同系物,是近年来发现的铁转运蛋白亚铁氧化酶,HP属亚铁氧化酶家族成员,具有亚铁氧化酶的活性,参与体内铁代谢。HP的表达可受铁、铜及锌等金属离子的调节。HP催化 Fe2+氧化生成 Fe3+,在介导铁的跨膜转运中有重要作用。

测定原理:

HP催化 Fe2+氧化为 Fe3+,Fe2+和 ferrozine反应显色,在 560 nm下有特征吸光值。通过测定Fe2+的减少速率可测得亚铁氧化酶的活性。

自备用品:

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体 50 ml×1瓶,4℃保存;

试剂二:液体 3 ml×1瓶,4℃保存;

试剂三:液体 30 ml×1瓶,4℃避光保存。

粗酶液提取:

按照组织质量(g):水 ml)为 1:5~10的比例(建议称取约 0.1g组织,加入 1ml蒸馏水),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤:

1.分光光度计预热 30min以上,调节波长至 560 nm,蒸馏水调零。

2.在玻璃比色皿中加入下列试剂

试剂名称(μL)测定管对照管
试剂一250250
试剂二5050
样本5050
蒸馏水150150
试剂三混匀,40℃静置 30 min500
试剂三500
混匀,立即测定 A对照和 A测定,ΔA=A对照-A测定。(每个测定管需设一个对照管)
HP活性计算:

标准曲线:y = 16.427x - 0.0006,R2 = 0.9998;(x为标准品浓度,μmol/ml;y为吸光值 ΔA)

(1)按样本质量计算

单位定义:每 g样本每分钟氧化 1nmol Fe2+定义为一个酶活力单位。

HP(nmol/min/g鲜重)=(△A+0.0006)÷16.427×V总÷T÷(W×V样÷V样总)×1000= 20.29×(△A+0.0006)÷W

(2)按样本蛋白浓度计算

单位定义:每 mg蛋白每分钟氧化 1nmol Fe2+定义为一个酶活力单位。

HP(nmol/min/mg prot)=(△A+0.0006)÷16.427×V总÷T÷(Cpr×V样)×1000= 20.29×(△A+0.0006)÷Cpr

V总:反应体系体积,0.1 ml;V样:加入样本体积 0.01 ml;V样总:加入提取液体积,1 ml;T:反应时间,30min;W:样品质量,g;Cpr:样本蛋白浓度,mg/ml;1000,μmol到 nmol的转换系数。

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