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土壤亚硝酸还原酶(S-NiR)测试盒(微量法)
土壤亚硝酸还原酶(S-NiR)测试盒(微量法)图片
货号: SNIR-1-G
包装: 100管/48样
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货号:SNIR-1-G
产品介绍

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

土壤亚硝酸还原酶是反硝化作用中的关键酶之一,参与亚硝酸盐至 NO的还原反应,它的活性反映了生物降解过程中氮素的转化效率,为氮素转化规律的研究提供一定的依据。

测定原理

亚硝酸还原酶可将 NO2-还原为 NO,使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的 NO2-减少,即 540nm处吸光值的变化可反应土壤中亚硝酸还原酶的活性。

需自备的仪器和用品

天平、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、水浴锅、低温离心机。

试剂组成和配制

试剂一:液体 4ml×1瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加 4ml蒸馏水溶解。

试剂三:液体 4ml×1瓶,4℃保存。(如出现沉淀可以 70-80℃加热溶解)

试剂四:液体 10ml×1瓶,4℃避光保存。(如出现沉淀可以 70-80℃加热溶解)

试剂五:液体 10ml×1瓶,4℃避光保存。

工作液:临用前根据用量将试剂四和试剂五以 1:1的比例混合。

样品处理

新鲜土样自然风干或 37度烘箱风干,过 30~50目筛。

测定操作表


空白管对照管测定管
风干土样(g)
0.020.02
蒸馏水(μL)
40
试剂一(μL)40
40
试剂二(μL)404040
混匀后,25℃反应 1h
试剂三(μL)404040
充分震荡 30S,10000rpm,4℃,离心 10min
上清液(μL)707070
工作液(μL)140140140
充分混匀,测定 540nm各管吸光值,分别记为 A空白管、A对照管、A测定管。空白管只要做一管,每个测定管需设一个对照管。

计算公式

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线:y = 1.5562x+ 0.0088,R2 = 0.996;x为标准品浓度(μmol/ml),y为吸光值(A标准管-A空白管)。

酶活单位定义:每 g土样每天还原 1μmol NO2-的量为一个酶活力单位。

S-NiR(μmol/d/g土样)=[A空白管-(A测定管-A对照管) -0.0088]÷1.5562×V标÷W÷T= 0.617×[A空白管-(A测定管-A对照管) -0.0088]÷W

T:反应时间,1h=1/24d;V标:标准液体积,0.04ml;W:样本质量,g。

b.使用 96孔板测定的计算公式如下

标准曲线:y = 0.7781x+ 0.0088,R2 = 0.996;x为标准品浓度(μmol/ml),y为吸光值(A标准管-A空白管)。

酶活单位定义:每 g土样每天还原 1μmol NO2-的量为一个酶活力单位。

S-NiR(μmol/d/g土样)=[A空白管-(A测定管-A对照管) -0.0088]÷0.7781×V标÷W÷T= 1.234×[A空白管-(A测定管-A对照管) -0.0088]÷W

T:反应时间,1h=1/24d;V标:标准液体积,0.04ml; W:样本质量,g。

注意事项

1.配制好的工作液 3天内使用完。

2.若吸光值超过  1.5,将上清液进行适当的稀释后再加入工作液显色,并在计算公式中乘以稀释倍数。

3.严格控制显色时间,否则会对结果有影响。

4.标准曲线线性范围为 0.03μmol/ml-1.5μmol/ml。

5.A空白管-(A测定管-A对照管)线性范围为 0.02-1.5。

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