人抗核仁抗体(ANA)elisa定量检测试剂盒操作步骤
**结果判读与分析**
完成反应后,使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度(OD值)。建议使用双波长检测(参考波长630nm),以减少孔间误差。根据标准品浓度与对应OD值绘制标准曲线,推荐采用四参数拟合(4PL)或对数-线性回归计算样本中ANA的浓度。
**注意事项:**
- 若样本OD值超出标准曲线范围,需用稀释液适当稀释后重新检测,最终结果乘以稀释倍数。
- 阴性对照OD值应≤0.1(参考值),阳性对照需符合试剂盒说明书给定的范围,否则需重复实验。
临床意义解读
ANA是自身免疫性疾病(如系统性红斑狼疮、干燥综合征)的重要筛查指标。定量结果需结合临床表现及其他实验室检查(如抗dsDNA抗体、ENA谱)综合判断:
- 低浓度阳性(1-3倍参考值上限):可能提示早期病变或非特异性反应,建议随访。
- **高浓度阳性(>3倍参考值上限)**:高度提示活动性自身免疫病,需进一步分型检测。
常见问题与优化建议
- **显色异常**:检查TMB底物是否避光保存,终止液加入后需立即混匀。
- **重复性差**:确保洗板彻底,避免孔间交叉污染;校准移液器精度。
- **批间差异**:不同批次试剂盒标准曲线不可混用,建议每批次单独标定。
**结语**
本试剂盒通过高特异性抗原捕获法实现ANA定量检测,操作标准化可提升结果可靠性。后续研究可探索自动化检测流程,以缩短报告时间并减少人为误差。