您好,欢迎来到试剂仪器网! [登录] [免费注册]
试剂仪器网
位置:首页 > 资料中心 > 技术文章 > 文章内容
转基因元件E9’终止子LAMP试剂盒实验过程
2022.09.21   点击424次

转基因元件E9’终止子LAMP试剂盒实验过程:

一、试剂准备

1. DNA模板

2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)

3.10×PCR Buffer

4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5.Taq酶

二、操作步骤

1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。

10×PCR buffer             5μl

dNTP mixl                 4μl

引物1(10pM)               2μl

引物2(10PM)              2μl

Taq酶(2U/μl)            1μl

DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl

加ddH2O至               50 μl

视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。

2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,后在72℃ 保温7min。

3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。

相关产品
DNA核酸提取及纯化试剂盒
关注(945)
RNA核酸提取及纯化试剂盒
关注(910)
犬巴贝斯虫PCR检测试剂盒
关注(15232)
鲍疱疹样病毒PCR检测试剂盒
关注(3821)
鲍肌肉萎缩症病毒PCR检测试剂盒
关注(4319)
鲍球状病毒PCR检测试剂盒
关注(5661)