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2,5寡腺苷酸合成酶检测试剂盒操作步骤
2021.10.05   点击573次

2,5寡腺苷酸合成酶检测试剂盒操作步骤:


1、准备:从冰箱取出试剂盒,室温复温平衡30分钟。


2、配液:用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。


3、加标准品和待测样本:取足够数量的酶标包被板,固定于框架上,分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔,记录各孔位置,在标准品孔中加入标准品50μL;待测样本孔中先加入待测样本10μL,再加样本稀释液40μL(即样本稀释5倍);空白对照孔不加。


4、温育:37℃水浴锅或恒温箱温育30min。


5、洗板:弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。


6、加酶标工作液:每孔加入酶标工作液50μL,空白对照孔不加。


7、温育:37℃水浴锅或恒温箱温育30min。


8、洗板:弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。


9、显色:每孔先加入显色剂A 液50μL,再加入显色剂B液 50μL,平板混匀器混匀30s(或用手轻轻震荡混匀30s),37℃避光显色15min。


10、终止:取出酶标板,每孔加终止液50μL,终止反应(颜色由蓝色立转黄色)。


11、测定:以空白孔调零,在终止后15分钟内,用450nm波长测量各孔的吸光值(OD值)。


12、计算:根据标准品的浓度及对应的OD值,计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样本的OD值,在回归方程上计算出对应的样品浓度,也可以使用各种应用软件来计算。最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

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