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拭子病毒采样及运输试剂盒,兼容细胞培养设计引物的原则
2020.08.05   点击908次

拭子病毒采样及运输试剂盒,兼容细胞培养(已分装)设计引物应遵循以下原则:

1.引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。


2.避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。


3.引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。


4.引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。


5.引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。


6.引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。


7.引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。


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