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高效液相色谱名词解释
2020.06.30   点击59次

氧化铝 [Alumina]

一种多孔微粒状的铝氧化物[Al203],用作正相吸附色谱的固定相。氧化铝有高活性碱性表面;10% 的浆态 pH 值是 10。用强酸清洗可成功变至中性或酸性范围[浆态pH值分别是 7.5 和 4 ]。氧化铝比硅胶吸湿性强。它的活性根据 Brockmann† 级含水量衡量:如活性一级含水1% 。

基线 [Baseline]

仅有流动相从色谱柱通过时色谱图记录的检测器响应信号。

管状柱 [Cartridge]

一种色谱柱,没有末端装置,只是一个空管,填充材料被两端玻璃简单封口。固相萃取色谱柱可平行地在真空状态下操作。高效液相色谱柱放置在支架上,每一端都有流路连接。色谱柱容易拆换,价廉,比常规的集成末端管体的色谱柱方便。

色谱图 [Chromatogram]

表示分析物流出浓度的图形或检测器响应信号或其他量化信号对时间或洗脱体积的曲线图。在平面色谱[即:薄层色谱或纸色谱]中,色谱图指含有的分离区域的纸或层。

色谱法 [Chromatography]

一个动态的物理化学分离方法,它利用组分在两相中的分配不同而分离,一种是固定的[固定相],另一种[流动相]相对固定相而移动。

柱体积  [Vc] [Column Volume  [Vc]]

装填料部分的管路几何体积[管内衡截面积乘以填料床长L]。色谱柱的颗粒间体积也称为粒间体积,是指流动相在填料床颗粒间占据的体积。空隙体积[V0]是流动相所占有的总体积,即粒间体积和颗粒内体积 [也称为孔隙体积]的总合。

检测器 [Detector] 

通过测量物理或化学性质[如,紫外/可见光吸收,示差折光率,荧光或传导率],来表示流出物组分变化的器件。如果检测器的相应信号与样品浓度成线性,通过适当的标准样品校准后,可以定量某个组分。通常,使用两种不同的检测器对分析有帮助。这样,可得到样品被分析物的更多确定的或特定的信息。有些检测器[如,电化学,质谱]是破坏性的;即它们使样品组分发生化学变化。如果这种检测器和非破坏性的检测器耦合使用,破坏性的检测器往往放在后面。

显示 [Display]

以色谱图的形式将检测器的电子响应信号在计算机屏幕上记录下来。先进的数据记录系统也能从事复杂的数学计算,如,峰面积积分, 基线扣除,匹配光谱,定量组分以及根据标准谱库比对鉴定未知物。

洗脱物 [Eluate]

从色谱柱出口流出含有被分析物的液体部分。在分析型高效液相色谱, 洗脱物的浓度或其中分析物的分子量由检测器测量。在制备型高效液相色谱中, 洗脱物按照均一的时间或体积间隔被连续收集,或者在检测器显示感兴趣目标存在时不连续收集。 这些组分随后将处理得到纯化合物。

洗脱顺序[Eluotropic Series]

参照在一个标准吸附剂上的特定分析物,溶剂按洗脱强度排序。当开发等度和梯度洗脱方法时,这种顺序很有用。Trappe 在利用自低而高的溶剂极性强度序列在矾土上分离油脂组分后创造了这个名词。† 后来,Snyder 测量了众多溶剂的强度在正相 LC 吸附剂上的参数并将其列在表格中。†† Neher 创造了一个很有用的表图,从中可以选择正相溶剂的同等洗脱[相同洗脱强度]混合物来优化薄层色谱 TLC 分离的选择性。一个典型的正相洗脱顺序可以从弱端的非极性脂肪族碳水化合物开始,即戊烷或己烷,之后进一步到苯[芳香族碳水化合物],二氯甲烷[氯化物],二乙醚,乙酸乙酯[酯类],丙酮[酮类],最后,甲醇[醇类]在最强端[如图 R-1]。

洗脱  [动词][Elute  [verb]]

用洗提色谱法分离。当所有样品组分还在色谱填料床中,洗脱过程可以中止[平面薄层或纸层析]或连续操作直到组分已经离开色谱填料床[柱色谱]。注:洗脱这个术语,为了避免和实际方法开发的混淆,更倾向于表示开发[在平面色谱中使用的术语]一个为特定分离而优化的分离体系(流动相合固定相)。

洗脱色谱  [Elution Chromatography*]

流动相连续通过填料床的色谱分离过程。在高效液相色谱中,一旦检测器基线稳定,分离系统达到平衡,一定量的样品被注射入流动相。直到所有目标分析物都通过检测器,洗脱过程才停止。

洗脱强度 [Elution Strength]

相对于固定相上的分析物的溶剂亲和性的衡量方法。一个弱溶剂不能替换分析物,使分析物较强地保留在固定相上。一个强溶剂可以完全替换并携带所有分析物分子无保留地通过色谱柱。为了获得有效分离和合理洗脱体积的适当平衡。溶剂经常被掺杂造成两相间的竞争,对特定分析物达到优化选择性和分离时间的目的。

偶极,介电常数,氢键,分子大小和形状以及表面张力都影响到洗脱强度。洗脱强度也由分离模式决定。在吸附或正相条件下,溶剂的洗脱顺序可能由低到高排列,而在反相分离条件下,这个顺序可能几乎相反[如图 R-1]。

荧光检测器 [Fluorescence Detector]

荧光检测器在特定光学波长激发样品。这样会使某些化合物产生荧光并在更高波长下发光。设在特定发射波长下并不会被激发光源遮挡的传感器只收集发射光。通常常原来不能被动产生荧光的分析物也可被衍生化,从而可以采取这种高灵敏度和选择性的检测方式,即,氨基酸 AccQ。

流速 [Flow Rate]

在单位时间内通过色谱柱的流动相体积。在高效液相色谱系统中,溶剂传输系统[泵]的流速由控制器设定。通过定时收集和测量的色谱柱出口流出液,可检查流速精度。由于溶剂的密度随温度的不同而变化,任何校准或流速测量必须考虑这个变化。如果可能,最准确的测量是通过重量而不是体积。流速的一致性 [精度] 和重现性对许多液相技术来说是至关重要的,特别是在分离过程中,保留时间是分析物鉴定的关键,或者,在凝胶渗透色谱中,保留时间的校准和相关性是测量聚合物精确分子量分布的关键。通常,分离条件用线速度来比较,而不是流速。线速度是用流速除以柱子横截面积计算得到。流速用体积/时间[如, 毫升/分钟]表示,线速度用长度/时间[如, 毫米/秒]表示。

凝胶渗透色谱 [Gel-permeation Chromatography]

基于分子大小和/或形状排除效应的分离。凝胶渗透色谱和凝胶过滤色谱描述固定相是胶体的分离过程。两者都是体积排除色谱法。Porath 和 Flodin首先描述的凝胶过滤,是使用葡聚糖凝胶和水相流动相来进行基于分子大小的生物分子分离。

梯度 [Gradient]

流动相中两种[或多种]混合溶剂浓度配比随时间的变化会引起洗脱强度的增加。分段梯度常用于固相萃取;每一步,洗脱液中的流动相会由从弱至强地突变。还有可能,在两步之间,通过排空固相萃取吸附剂床层,从一种溶剂换成另一种不相溶的溶剂。

进样口 [Inlet]

流动相和样品进入色谱柱的一端。多孔的,惰性玻璃材料保留了填料,保护吸附剂层入口不受微粒污染。好的高效液相色谱试验规定样品和流动相不含微粒,这种要求对于入口容易堵塞的小粒径色谱柱来说是强制性的。如果柱床进样口被堵住而产生比平时高的反压,有时,反转流动方向,使流出液进入废液瓶,可以冲开堵塞,洗掉停留在表层的碎片。如果碎片已经流过表层,进入床层进样口端,那么色谱柱很可能就到使用寿命液相色谱*

[LC] [Liquid Chromatography [LC]]

流动相是液体的一种分离技术。液相色谱方法可在色谱柱上或平面[薄层色谱 TLC 或纸色谱]上使用。现代液相色谱技术使用更小的颗粒和更高进样口压力,从 1970 年开始被称为高效(或高压)液相色[HPLC]。2004 年,超高效液相色谱使液相的性能极大地提升到了新高度[参见"超高效液相色谱 UPLC® 技术"]。

流动相 [参考洗出液,洗提液 Eluate, Eluent][Mobile Phase* [see Eluate, Eluent]]

按照某一方向从固定相吸附床层长度方向渗流过的流体。流动相可以是液体[液相色谱]或气体[气体] 或超临界流体[超临界流体色谱法]。气相色谱法中,名词载气就是流动相。在洗提色谱法中,流动相也可叫做洗提液,而洗出液被定义为流动相通过吸附剂后含有目标化合物的部分。

正相色谱 [Normal-phase Chromatography]

固定相极性比流动相极性强的洗脱方法。在液相色谱中,使用正相色谱这一名词是为了强调与反相色谱的对比。

制备液相色谱法 [Preparative Chromatography]

使用液相色谱法分离具有一定纯度和一定量的化合物,以满足后续试验或使用的过程。制药或生物技术纯化过程中,直径几英寸的色谱柱可处理数千克原料。如仅分离几毫克珍贵的天然产物,分析型高效液相色谱柱就足够了。两者都是制备色谱方法,仅级别不同[参见"高效液相色谱量级"和表 A]。

分离度  [Rs, 见选择性][Resolution* [Rs, see Selectivity]]

两个色谱峰的分离,以相应保留时间的差异来表示,除以基线处的平均峰宽。Rs =1.25 代表相同宽度的两个峰完全在基线被分开。当 Rs = 0.6 时,可观察到色谱图接近顶点有两个峰。高效的色谱柱得到窄峰并提高分离困难样品的分离度;但分离度的提高仅仅是 N 的平方根。提高分离度最有效的方法是改变色谱分离的流动相/固定。

保留时间 [tR][Retention Time* [tR]]

洗脱开始[通常在高效液相色谱中,进样时间]至峰的最高点出现的时间。tR减去滞留时间 [tM, 从进样到分析物完全无保留的峰顶点洗脱出来的时间]就是调整保留时间 tR'。

反相色谱 [Reversed-phase Chromatography]

色谱法中,流动相的极性远比固定相高的洗脱过程,例如,表面键合烷基链的多微孔硅胶材料。 注意:避免不正确的拼写 reverse phase [参见参考文献 4 "一些反相分离机理的创新想法"]。

固相萃取 [SPE] [Solid-phase Extraction [SPE]]

使用液相原理在微型色谱床实现从复杂体系的分离,富集和/或纯化分析物的样品制备技术。离线固相萃取使用[手动或自动]大颗粒独立塑料管或微型洗脱板,借助低压或真空辅助流动。在线固相萃取使用装填小颗粒的微型高效液相色谱柱,借助更高压力和转换阀变换固相萃取柱在线连接 HPLC 色谱柱或离线连接废液瓶。固相萃取方法使用分段梯度[参见"Gradient"]完成柱老化,进样,清洗和洗脱步骤。上样的液相条件通常是使重要分析物的 k 越高越好,因此分析物在上样和清洗步骤中会完全被保留。洗脱时则变为更强的溶剂混合物[参见"洗脱强度"]。目标是去除基质干扰,并分离出溶液中的分析物,使其达到一定浓度以适合后续分析工作。

固定相 [Stationary Phase]

形成色谱系统的两相之一。它可以是固体,胶状或液体。如果是液体,它可以在分布固体上。这种固体对分离过程可有作用或可无作用。液体也可以和固体进行化学键合[键合相]或固定在上面[固化相]。

超高效液相色谱 UPLC® 技术 [UPLC Technology]

装有亚 2 微米的颗粒柱,能够在非常高的压力下操作并经过整体设计的高性能液相色谱系统称为超高效液相色谱[UPLC 技术]。† 相比高效液相色谱,该技术主要的优越性是显著提高了分离度,以及/或在保持现有高效液相色谱分离的分离度时,获得更短分析时间。

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