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人白喉类毒素抗体(DT Ab)酶联免疫分析试剂盒实验操作步骤
2020.03.18   点击392次

人白喉类毒素抗体(DT Ab)酶联免疫分析试剂盒操作步骤

1、编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)

2、加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,

3、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4、配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6、加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7、温育:操作同3。

8、洗涤:操作同5。

9、测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

10、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.

11、终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

标本要求

1、标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

2、不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

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