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细胞治疗之无血清细胞冻存
2019.04.01   点击96次

在细胞培养中,细胞冻存是最关键环节之一,尤其在细胞治疗、细胞存储中对细胞冻存更有特殊要求,下面就根据降温速度以及冻存液组分对细胞冻存做详细介绍。

根据降温速度区分,细胞冻存可以分为程序降温冻存与非程序降温冻存。根据冻存方式不同可以分为慢速冻存(程序降温法)与快速冻存(非程序降温法)。

程序降温冻存技术要点是慢冻,标准的冻存程序为降温速率-1~-2/℃ min;当温度达-25℃以下时,可增至-5 ℃~-10℃/min。之前,常用的传统方法是将冻存管置于4 ℃30分钟--->-20 ℃ 60分钟--->-80 ℃过夜--->液氮罐。不过,由于步骤较多,间隔时间又长,很容易遗忘。之后,人们也开始使用程序降温盒。将冻存管放入程序降温盒中,再将程序降温盒放入-80 ℃冰箱。以1 ℃/min的速度进行降温。

快速冻存即不需要经过梯度降温,直接将细胞放入-80 ℃冰箱24h,后转入液氮长期冻存。快速冻存简化了冻存步骤,同时不需要使用梯度冻存盒。

不同的冻存方法代表了不同的冻存体系,程序降温法使用的冻存液主要配方为培养基、血清、DMSO。血清大多采用牛源,同时血清中未知成分和病毒等感染物质会给冻存带来影响与风险,该方法科研上广泛使用,并延续至今,但是显然已经不能适应现今细胞治疗的应用场景。

随着细胞治疗以及细胞储存产业发展,细胞冻存也面临从科研应用走向产业转化。冻存要求发生改变,因为冻存细胞要进行临床应用,所以冻存液成分由原来血清变为无血清,无动物源成分,冻存液中使用的所有原料均应符合临床或药物需求。随着细胞冻存数量增加,冻存流程简化也成为必然趋势,因此无血清非程序降温冻存液应运而生。

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