1.什么是细胞永生化

细胞永生化是指细胞在体外培养的过程中，由于自身基因变化或者是外界各种刺激条件，避免的正常传代细胞衰老死亡的过程，以至于可以长期传代培养、无限分裂增殖。

2.细胞永生化的意义

（1）能获得大量的细胞资源，改善细胞传代少、增殖慢的困境，使细胞可以无限传代，并且永生化的细胞生长更强劲，节省了实验周期；

（2）可以帮助研究者熟悉掌握细胞增殖与衰老死亡的的生理过程；

（3）是体外研究肿瘤细胞各个阶段的的良好模型，为癌症治疗、抑制癌症细胞增殖等提供新的研究方向；

（4）在遗传上属于同一种群，能够建立相同遗传性状的细胞库，有助于实验结果的稳定性。

3.细胞永生化的方法

细胞永生化一般有两种分子机制：外源病毒蛋白抑制或者自身突变导致原癌基因活化或抑癌基因失活，使细胞绕过正常细胞的周期检查点，细胞衰老死亡途径受阻，达到无限增殖的目的;另一种是激活端粒酶使端粒长度延长，可以持续增殖；具有致瘤性的病毒如SV40病毒、EB病毒、人乳头状瘤病毒HPV等。

细胞永生化有不同的方法，不同的方法适用于不同的组织细胞。如HPV可介导人的上皮细胞如口腔上皮细胞、表皮细胞、角化上皮等的上皮细胞永生化；猿猴病毒的SV40 大T抗原（TAg）用于黏附细胞、成纤维细胞、内皮细胞等、EBV用于淋巴母细胞样细胞；端粒酶TERT则用于间充质干细胞和其他一些细胞。

3.1端粒酶TERT

端粒（Telomere）是一种真核细胞染色体末端DNA-蛋白复合体的特殊结构。端粒有重要的生物学功能，可保护染色体末端的正常结构，免于退化和消亡，因此在染色体正常复制、细胞凋亡和细胞转化等方面发挥重大作用。端粒酶可以合成新的端粒，从而延长端粒的长度，通常情况下，端粒酶表达量较低，但在病毒介导hTERT下，端粒酶可以正常表达，从而增长细胞的生命周期。

3.2 SV40的T抗原

SV40是真核细胞病毒，SV40的T抗原（TAg）通过与肿瘤细胞内抑制因子Rb和p53结合并抑制其功能而起作用。

3.3原癌基因

研究表明，原癌基因可以激活端粒酶的活性，因此激活Myc, c-Jun, c-Ias, vsrc、Mdm2、RAS、c-fos、Bmi1、CDK4等原癌基因可以促进细胞永生化的进程。

3.4抑癌基因

使抑癌基因p53, pRb, BRCA1, DPC4等失活，同样可以激活端粒酶，使细胞得到永生化。

4.细胞永生化的应用

永生化细胞系被广泛用作功能和分子研究的生物材料来源，并代表了基因组 DNA、表达 RNA 以及蛋白质和系统生物学分析的潜在无限来源。此外，这些细胞系可用作各种研究的培养模型，包括功能和血清学研究、分子和遗传研究、大规模药物库筛选、疫苗研究和高通量生物学研究。