试剂仪器设备原料
银牌会员第4
访问量: 617074   网址: hydranal.cnreagent.com    在线留言 
产品搜索
检测试剂盒 >> 生化试剂盒
磷酸丙糖异构酶(TPI)检测试剂盒(UV板,微量法)
磷酸丙糖异构酶(TPI)检测试剂盒(UV板,微量法)图片
包装: 100管/96样
索取资料及报价
产品介绍

植物叶绿体中磷酸丙糖异构酶是光合作用中参与calvin循环的重要酶。作用于磷酸甘油醛和磷酸二羟丙酮之间的转化,磷酸二羟丙酮能快速透过叶绿体的包膜进入细胞质,并在其中逐步转化为蔗糖。

磷酸丙糖异构酶将磷酸二羟丙酮转化为3-磷酸甘油醛,3-磷酸甘油醛与NAD在3-磷酸甘油醛脱氢酶的作用下生成3-磷酸甘油酸和NADH,340nm处的吸光度变化反映了磷酸丙糖异构酶的活性的高低。

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品内容:

提取液一:液体100ml×1瓶,4℃保存。

提取液二:液体100ml×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体12ml×1瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前加2ml蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

试剂三:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前加2ml蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

试剂四:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前加2ml蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

需自备的仪器和用品:

天平、低温离心机、研钵、震荡仪、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。

酶液提取:

1.总TPI酶提取:建议称取约0.1g样本,加入1ml提取液一,冰浴匀浆后超声破碎(冰浴,200W,破碎3s,间歇7s,总时间1min),然后4℃,8000g离心10min,取上清测定。

2.胞浆和叶绿体TPI酶的分离:按照植物组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g样本,加入1ml提取液一),冰浴匀浆后于4℃,200g离心5min,弃沉淀,取上清在4℃,8000g离心10min,取上清用于测定胞浆TPI酶活性,取沉淀加1ml提取液二,震荡溶解后超声破碎(冰浴,200W,破碎3s,间歇7s,总时间1min),然后4℃,8000g离心10min,取上清测定叶绿体中TPI酶活性。建议测定总TPI酶活性,按照步骤①提取粗酶液,若需要分别测定胞浆和叶绿体中的TPI,则按照步骤②提取粗酶液。

操作步骤:

1.分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2.取微量石英比色皿/96孔板,依次加入120μL试剂一,20μL试剂二,20μL试剂三,20μL试剂四,20μL粗酶液,充分混匀,记录340nm处10s的吸光值A1和310s的吸光值A2,△A=A2-A1。

注意事项:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

(1)按照样本蛋白浓度计算

酶活单位定义:每毫克组织蛋白每分钟生成1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

TPI(nmol/min/mg prot)= ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr)÷T=321.54×ΔA÷Cpr

(2)按照样本质量计算

酶活单位定义:每克组织每分钟生成1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

TPI(nmol/min/g鲜重)= ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W ×V样÷V样总)÷T=321.54×ΔA÷W

V反总:反应体系总体积,0.2ml;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103L/ mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.02ml;V样总:加入提取液体积,1ml;T:反应时间,5min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本质量,g 。

b.用96孔板测定的计算公式如下

(1)按照样本蛋白浓度计算

酶活单位定义:每毫克组织蛋白每分钟生成1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

TPI(nmol/min/ mg prot)= ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr)÷T= 643.08×ΔA÷Cpr

(2)按照样本质量计算

酶活单位定义:每克组织每分钟生成1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

TPI(nmol/min/g鲜重)= ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W ×V样÷V样总)÷T=643.08×ΔA÷W

V反总:反应体系总体积,0.2ml;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103L/ mol/cm;d:比色皿光径,0.5cm; V样:加入样本体积,0.02ml;V样总:加入提取液体积,1ml;T:反应时间,5min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml; W:样本质量,g

相关产品
我要咨询 关闭
  •      
  • 姓名* 
  • 电话* 
  • 单位* 
  • email 
  • 留言内容*
  • 验证码*  
  • 让更多商家关注