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植物叶绿体中磷酸丙糖异构酶(TPI)检测试剂盒(紫外分光光度法)
植物叶绿体中磷酸丙糖异构酶(TPI)检测试剂盒(紫外分光光度法)图片
包装: 50管/48样
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产品介绍

植物叶绿体中磷酸丙糖异构酶是光合作用中参与calvin循环的重要酶。作用于磷酸甘油醛和磷酸二羟丙酮之间的转化,磷酸二羟丙酮能快速透过叶绿体的包膜进入细胞质,并在其中逐步转化为蔗糖。

磷酸丙糖异构酶将磷酸二羟丙酮转化为3-磷酸甘油醛,3-磷酸甘油醛与NAD在3-磷酸甘油醛脱氢酶的作用下生成3-磷酸甘油酸和NADH,340nm处的吸光度变化反映了磷酸丙糖异构酶的活性的高低。

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品内容:

提取液一:液体50ml×1瓶,4℃保存。

提取液二:液体25ml×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体30ml×1瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前加5ml蒸馏水充分溶解。

试剂三:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前加5ml蒸馏水充分溶解。

试剂四:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前加5ml蒸馏水充分溶解。

需自备的仪器和用品:

天平、低温离心机、研钵、震荡仪、紫外分光光度计、1ml石英比色皿。

操作步骤:

一、酶液提取

按照植物组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1ml提取液一)加入提取液一,冰浴匀浆后于4℃,1000g离心5min,取上清在4℃,4500g离心20min,去上清,取沉淀加0.5ml提取液二,置于震荡仪上震荡30s溶解,置冰上30min,重复操作一次(或者震荡溶解后超声,超声条件为功率200W,破碎3s,间歇7s,总时间1min),然后4℃,12000g离心10min,取上清待测。

二、测定操作

1.分光光度计预热30min,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2.取1ml石英比色皿,依次加入600μL试剂一,100μL试剂二,100μL试剂三,100μL试剂四,100μL粗酶液,充分混匀,记录340nm处10s的吸光值A1和310s的吸光值A2,△A=A2-A1。

三、浓度计算:

(1)按照样本蛋白浓度计算

酶活单位定义:每毫克组织蛋白每分钟生成1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

TPI(nmol/min/mg prot)= ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr)÷T=321.54×ΔA÷Cpr

(2)按照样本质量计算

酶活单位定义:每克组织每分钟生成1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

TPI(nmol/min/g)= ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W ×V样÷V样总)÷T=160.77×ΔA÷W

V反总:反应体系总体积,1ml;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103L/ mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.1ml;V样总:加入提取液体积,0.5ml;T:反应时间,5 min; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本质量,g

注意事项:配置好的试剂二、试剂三、试剂四3天内使用完。

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