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果胶裂解酶活性检测试剂盒(可见分光光度法)
果胶裂解酶活性检测试剂盒(可见分光光度法)图片
包装: 50管/24样
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产品介绍

果胶裂解酶(EC 4.2.2.10)是果胶酶的重要组成部分,催化果胶分子链的消除裂解。来源比较广泛,主要来源于微生物,在食品加工工业中提高果汁产量方面有重要意义,在减少环境污染和降低能源消耗方面也具有潜在的应用价值。

果胶裂解酶作用于果胶中的α-1,4糖苷键,生成在还原端C4和C5之间位置具有不饱和键的不饱和寡聚半乳糖醛酸,在235nm处有特征吸收峰,测定235nm下吸光度的上升来表示果胶裂解酶的活性。

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品内容:

试剂名称规格保存条件
提取液液体60ml×1瓶2-8℃
试剂一液体50ml×1瓶2-8℃

溶液的配制:

试剂一:溶液中如果有沉淀存在,可以50℃水浴助溶。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计、台式离心机、恒温水浴锅、1ml石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆。10000g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1ml提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4℃离心10min,取上清置于冰上待测。

3.培养液:直接测定。

二、测定操作

1.分光光度计预热30min以上,调节波长至235nm,蒸馏水调零。

2.操作表:(在1.5ml离心管中)。

试剂名称测定管空白管
试剂一(μL)900900
酶液(μL)100-
蒸馏水(μL)-100
充分混匀后测定235nm下的初始值A1,40℃反应30min后再次测定吸光值A2,计算ΔA

测定管=A2测定管-A1测定管,ΔA空白管= A2空白管-A1空白管,ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管。

三、果胶裂解酶活性计算

1.按照蛋白浓度计算

酶活性定义:在40℃,pH5.5条件下,每毫克蛋白每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL活性(U/mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V反总×109÷(V样×Cpr)÷T=64.1×ΔA÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活性定义:在40℃,pH5.5条件下,每克组织每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL活性(U/g质量)=ΔA÷(ε×d)×V反总×109÷(V样×W÷V样总)÷T= 64.1×ΔA÷W

3.按照细菌、真菌数量计算

酶活性定义:在40℃,pH5.5条件下,每104个细胞每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL活性(U/104cell)= ΔA÷(ε×d)×V反总×109÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T= 64.1×ΔA÷细胞数量

4.按照培养液体积计算

酶活性定义:在40℃,pH5.5条件下,每毫升培养液每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL活性(U/ml)=ΔA÷(ε×d)×V反总×109÷V样÷T= 64.1×ΔA

ε:不饱和半乳糖醛酸摩尔消光系数:5200L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V反总:反应总体积,0.001L;V样:反应体系中样本体积,0.1ml;V样总:加入提取液体积,1ml;Cpr:样本蛋白浓度,mg/ml;W,样本质量,g;T:反应时间,30min;109:换算系数,1mol=109nmol。

注意事项:

1.若ΔA大于0.5,将粗酶液用蒸馏水稀释后再进行测定。若A测定管大于1.5时,建议将样本用蒸馏水稀释后再进行测定。

2.建议一次测定不要测定过多样本以免耽误过多的酶促反应时间。

3.空白管正常情况下变化不超过0.02。

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