产品描述

HTH-01-015 是一种有效的选择性 NUAK1 抑制剂，其IC50 为100 nM，比作用于NUAK2的选择性高100多倍。

靶点（IC50 & Targe）

NUAK1,100nM

NUAK2,>10μM

体外研究

在表达NUAK1和NUAK2的HEK-293细胞中，HTH-01-015抑制NUAK1介导的MYPT1磷酸化。HTH-01-015抑制NUAK1+/+ MEFs中细胞迁移，并抑制U2OS细胞侵袭。此外，HTH-01-015抑制两个细胞系的细胞增殖。[1] 在U2OS 细胞中，HTH-01-015抑制剂显著限制细胞进入有丝分裂期。[2]

激酶实验

激酶活性试验:纯化的GST–NUAK1和GST–NUAK1A195T的体外活性使用Cerenkov计数法测量，其通过计数来自γ-32PATP的放射性32P整合到Sakamototide底物肽进行。反应在50 μL反应体积中于30°C下进行30分钟，通过将40 μL反应混合物点样到P81纸上终止反应，并立即浸入50 mM正磷酸中。样品在50 mM正磷酸中洗涤3次，随后用丙酮冲洗并空气干燥。激酶介导的γ-32PATP整合到Sakamototide通过Cerenkov计数定量。活性单位被定义为，1小时内催化1 nmol of [32P]磷酸整合到底物的量。

细胞实验

Cell lines: U2OS细胞和MEFs

Concentrations: 10 μM

Incubation Time: 5天

Method: 细胞增殖测定在96孔板中使用CellTiter 96® Aqueous非放射性细胞增殖试验试剂盒根据制造商方案以比色法进行。首先，以2000细胞/孔接种U2OS细胞，以3000细胞/孔接种MEFs。增殖试验在10 μM HTH-01-015存在或不存在下进行5天。

(Only for Reference)

参考文献

[1] Banerjee S, et al. Biochem J. 2014, 457(1), 215-225.

[2] Banerjee S, et al. Biochem J. 2014, 461(2), 233-245