产品描述

WZ4003是高特异性的NUAK kinase抑制剂，细胞试验中作用于NUAK1和NUAK2的IC50分别为20 nM和100 nM，对其他139个激酶没有显著抑制作用。

靶点（IC50 & Targe）

NUAK1,20nM

NUAK2,100nM

体外研究

在表达野生型NUAK1的HEK-293细胞中，WZ4003 (3–10 μM)显著抑制NUAK1介导的MYPT1磷酸化。此外，WZ4003 (10 μM)抑制MYPT1 Ser445磷酸化以及细胞迁移，入侵和扩散，与在MEFs中基因敲除，或U2OS细胞中抑制NUAK1的的程度类似。[1] WZ4003也对L858R/T790M突变体EGFR表现出高的特异亲和力，同时显著降低含有Ba/F3细胞的T790M 的IC50。[2]

激酶实验

IC50测定:活性GST-NUAK1，GST-NUAK1 A195T和GST-NUAK2酶利用谷胱甘肽-琼脂糖从HEK-293细胞裂解物中纯化36-48小时，随后哺乳动物的瞬时转染建立表达N端GST标记的 NUAK1，NUAK1A195T 或 NUAK2。对缩氨酸激酶试验，使用96孔板，每个反应以一式三份进行。每个反应的总体积为50微升，含有100纳克NUAK1 (野生型或A195T 突变体) 或 NUAK2的 50 mM Tris/HCl (pH 7.5)溶液， 0.1 mM EGTA，10 mM 醋酸镁，200 μM Sakamototide，0.1 mM γ -32PATP (450–500 c.p.m./pmol) 和溶解于DMSO的指示浓度的抑制剂。30°C下培育30分钟后，加入25 mM (终浓度) EDTA与镁螯合以终止反应。然后，将40微升反应混合物点样到P81纸上，并浸入50 mM磷酸中。样品在50 mM磷酸中清洗3次，然后用纯丙酮清洗，并在空气中干燥。γ -32PATP与Sakamototide的整合通过Cerenkov计数定量。该值表达为DMSO对照组的百分比。得出IC50曲线，IC50值使用GraphPad Prism软件计算。

细胞实验

Cell lines: U2OS 细胞，和 MEFs

Concentrations: ~10 μM

Incubation Time: 5天

Method: 细胞增殖测定在96孔板中使用CellTiter 96 含水的非放射性细胞增殖测定试剂盒，根据制造商说明进行。最初，U2OS 细胞以2000细胞每孔接种，MEFs以3000细胞每孔接种。增殖测定在10 μM WZ4003存在或不存在下进行5天。

(Only for Reference)

参考文献

[1] Banerjee S, et al. Biochem J. 2014, 457(1), 215-225.

[2] Zhou W, et al. Nature. 2009, 462(7276), 1070-1074.