产品描述

BRD4770是一种histone methyltransferase G9a抑制剂，其IC50为6.3 μM，并且会诱导细胞死亡。

靶点（IC50 & Targe）

G9a

体外研究

在胰腺癌细胞系PANC-1中，BRD4770通过对G9a的抑制降低细胞内二-和三甲基化H3K9水平，诱导衰老，并抑制贴壁依赖性和非依赖性增殖。[1]在PANC-1细胞中，棉子酚和BRD4770的结合增加LC3-II水平和自噬体数量，并因此协同作用于诱导细胞死亡。[2]

激酶实验

G9a的生化作用:

解离增强的镧系元素氟-免疫测定(DELFIA)在Neutravidin涂覆的白色，不透明384孔板中进行。测试化合物在包含4% DMSO的50mM Tris-HCl pH 8.5中稀释为12 μg/mL，并且将10 μL分配到各孔中。空白和对照孔仅加入化合物缓冲液。10 μg/mL GST-G9a和40 μM SAM在50mM Tris HCl pH 8.5/10 mM DTT中稀释，并加入20 μL体积。空白孔仅加入Tris/DTT缓冲液。通过加入10 μl 含H3(1-20)- cysbiotin底物的50 mM Tris pH 8.5起始反应，并在室温下培养60分钟。板用100 μl 洗涤液(50mM Tris pH 7.4，150 mM NaCl，0.05% Tween 20，0.2% BSA)清洗3次。接下来，包含5ng α-2X-di-meth H3-K9和5ng 山羊抗兔子Eu 螯合物的50 μl荧光免疫分析(FI)缓冲液(50 mM Tris HCl pH 7.8，150 mM NaCl，0.05% Tween 40，25 μM DTPA，0.2% BSA，0.05% BGG)加入到板的所有孔中，并将板在室温下再培养1小时。板用100 μL洗涤液清洗3次，50 μL增强液加入到每孔中。45分钟后，时间分辨光谱法在Viewlux微孔板成像仪上成像15秒，条件设置为354 μs窗口，400 μs延迟，360 nm激发光，和618 nm发射光。

细胞实验

Cell lines: PANC-1 细胞

Concentrations: ~20 μM

Incubation Time: 72小时

Method: PANC-1细胞接种于6孔板，并用BRD4770处理72小时。将细胞胰蛋白化，并使用CytoSelect96孔细胞转化试验测试软琼脂中集落的形成，使用CyQuant GR染料测量总细胞核酸水平。荧光性通过Analyst HT板阅读器使用485/520 nm滤波装置检测。

(Only for Reference)

参考文献

[1] Yuan Y, et al. ACS Chem Biol. 2012, 7(7), 1152-1157.

[2] Yuan Y, et al. Cell Death Dis. 2013, 4,e690.