产品描述

MS436是一种有效的BET bromodomain抑制剂，对BRD4 (1) 和 BRD4 (2)的Ki分别为<0.085 μM 和 0.34 μM。

靶点（IC50 & Targe）

BRD4 (1),<0.085μM(Ki)

BRD4 (2),0.34μM(Ki)

体外研究

MS436对第一溴结构域蛋白比对第二溴结构域蛋白表现出更低纳摩尔的亲和力。在NF-κB介导产生一氧化碳和促炎性细胞因子白细胞介素-6的小鼠巨噬细胞中，MS436有效抑制BRD4活性，而对活细胞没有显著抑制作用。[1]

激酶实验

荧光各向异性结合测定:

新合成的重氮苯化合物对各种溴结构域蛋白的结合亲和力通过荧光各向异性竞争测定法使用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的MS417作为测定探针进行评估。竞争实验通过BrD 蛋白质(0.25–1 µM) 和荧光探针(80 nM)，以及逐渐增加浓度的未标记竞争配体在PBS缓冲液中(pH 7.4)进行，总体积为80 µL。荧光配体和蛋白质在25°C下培养1小时后，用Safire 2酶标仪测定。在竞争结合试验中，荧光配体的浓度小于2Kd，蛋白质浓度设置为结合50-80%荧光配体时的浓度。竞争配体的解离常数使用校正的Nicolovska-Coleska和他同事引进的Cheng-Prussoff方程式计算。假设一个位点竞争结合模型，使用方程式根据IC50值计算Ki值，IC50值使用Prism拟合数据重新获得。

细胞实验

Cell lines: 小鼠巨噬细胞 RAW264.7 细胞

Concentrations: ~100 μM

Incubation Time: 24小时

Method: 小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞以10000细胞每孔的密度接种于96孔板，在37℃下培养18小时。然后将细胞用100 μL重氮苯溴结构域蛋白抑制剂处理24小时。将10 μL MTT溶液(4 mg/ml)加入到每孔中，并在37°C下培养4小时。然后将上层清夜移除，细胞固定在100 μL 100% DMSO中。重氮苯化合物首先溶解在DMSO中，然后在培养基中稀释为0.28到50000 nM的浓度。DMSO的终浓度调节为0.05% (v/v)。降低的程度使用EnVison 2104多标阅读器在570/630 nm下测定吸光度确定。

(Only for Reference)

参考文献

[1] Zhang G, et al. J Med Chem. 2013, 56(22), 9251-9264.