产品描述

PD0325901是一种选择性的，非ATP竞争性MEK抑制剂，无细胞试验中IC50为0.33 nM，对ERK1和ERK2磷酸化抑制作用比CI-1040强500倍左右。Phase 2。

靶点（IC50 & Targe）

MEK,0.33 nM (cell free)

体外研究

PD0325901比另一种MEK抑制剂CI-1040具有更高的渗透率。与CI-1040相比，PD 0325901可以到达体系的更深层。[1]PD0325901是非ATP竞争性的MAPK激酶MEK抑制剂，抑制鼠类结肠26细胞的MEK时IC50为0.33nM。苏氨酸/酪氨酸激酶MEK是RAS/RAF/MEK/ERK信号通路的关键组成部分，在人类肿瘤细胞中通常是激活的。PD0325901精确有效地抑制MEK，作用于MEK1和MEK2时Ki值为1nM。PD0325901作用于细胞ERK1和ERK2的磷酸化效果比CI-1040强到大约500倍。[2]

体内研究

PD0325901阻止细胞黑色素瘤细胞系的生长，使异种移植鼠模型的细胞周期停止在G1期，引起细胞凋亡单独口服25 mg/kg PD032590124后，ERK的磷酸化作用被阻断达到50%以上。PD 0325901的抗癌活性已经被用于更广泛的人类移植瘤的研究中，在研究的人类肿瘤模型中,有6/7被PD 0325901明显抑制。[2] PD0325901抑制恶性黑色素瘤细胞系生长。PD0325901抑制TPC-1细胞和K2细胞生长，GI50分别为11和6.3 nM。PD0325901浓度非常低时(10 nM)也明显抑制携带BRAF突变的PTC细胞生长，且同样浓度时只稍微提高携带RET/PTC1重排的PTC细胞生长。PD0325901作用于多种PTC细胞系，有效抑制ERK1/2磷酸化。[3]

激酶实验

体外级联实验:

在有含p44MAPK(GST-MAPK)的谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白和含p45MEK(GST-MEK)的谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白存在情况下，测定32P渗透到髓鞘碱性蛋白(MBP)的渗透率。实验溶液包括20 mM HEPES,pH 为7.4,10 mM MgCl2,1 mM MnCl2,1 mM EGTA,50 mM gamma-32PATP,10 mg GST-MEK,0.5 mg GST-MAPK,和40 mg MBP，终体积为100 mL。实验进行20分钟后，加入三氯乙酸终止反应，然后通过GF/C过滤器过滤。使用1205 Beta板测定保留在过滤器中的32P。测定不同剂量PD0325901，绘制剂量反应曲线。

细胞实验

Cell lines: PTC细胞

Concentrations: 0.1 nM- 1 μM

Incubation Time: 48小时

Method:1×104个PTC细胞接种在含1mL培养基的24孔板上，在37oC下温育4天。在实验第一天加入不同浓度MEK抑制剂，重复三次。MTT溶于0.8% NaCl溶液，浓度为5 mg/mL，实验第三天，每孔加入0.2 mL，测定GI50或者测定每天的细胞生长曲线。细胞和MTT在37oC下温育3小时。然后从孔中吸出液体除去。染色的细胞溶于0.5 mL DMSO，然后使用Synergy HT增殖酶标仪在570 nm处测定吸光值。然后测定GI50, 按公式 100×(T − T0)/(C − T0)计算细胞生长。

(Only for Reference)

动物实验

Animal Models: 携带PTC细胞的Ncr-nu/nu鼠

Formulation: 80 mM柠檬酸缓冲液(pH 7)

Dosages: 20-25 mg/kg

Administration: 口服饲喂

(Only for Reference)

参考文献

[1] Barrett SD, et al. Bioorg Med Chem Lett, 2008, 18(24), 6501-6504.

[2] Judith SS, et al. Proc Amer Assoc Cancer Res.2004,45, Abstract #4003

[3] Henderson YC, et al. Mol Cancer Ther, 2010, 9(7), 1968-1976.

[4] Paterson A, et al. Blood, 2012, 119(7), 1726-1736.

[5] Ricciardi MR, et al. J Mol Med (Berl), 2012, 90(10), 1133-1144.

[6] Pratilas CA, et al. Cancer Res, 2008, 68(22), 9375-9383.

[7] Legrier ME, et al. Cancer Res, 2007, 67(23), 11300-11308.

[8] Barrett SD, et al. Bioorg Med Chem Lett, 2008, 18(24), 6501-