产品描述

Nefiracetam作用于Ro 5-4864引起的抽搐，是GABAergic，胆碱及单胺类的神经系统增强剂。Phase 2。

靶点（IC50 & Targe）

GABAR

体外研究

Nefiracetam在1 μM浓度下增加2倍钙通道电流的长效组分，而不影响瞬变组分。[2] Nefiracetam在亚微摩尔浓度下(0.01–0.1 μM)诱导Ach激发电流的短期抑制，在微摩尔浓度下(1–10 μM)对电流具有长期增强作用。Nefiracetam与PKA和PKC通路相互作用，这可能解释了认知能力增强剂发挥作用的细胞机理。更低浓度(亚微摩尔)的益智药Nefiracetam治理10分钟后使Ach诱发的电流减少到对照组的30% (0.01 μM) 和38% (0.1 μM)。[3]在大鼠海马神经元的原代培养中，nefiracetam增加烟碱敏感的兴奋性突触后电流的比率。在大鼠海马切片的CA1区和齿状回中，Nefiracetam诱导突触传导的持久易化， 该易化作用会被α-银环蛇毒素和美加明抑制。Nefiracetam通过与PKC通路相互作用增强烟碱Ach受体的活性，从而增加谷氨酸从突出前末梢的释放，然后导致海马神经传递的持久易化。[4]

体内研究

Nefiracetam口服给药抑制EL小鼠体内Ro 5-4864诱导的惊厥。Nefiracetam在高于10 mg/kg剂量下也会有效抑制DDY 小鼠体内Ro 5-4864诱导的抽搐。[1] 在每次训练项目前，Nefiracetam(每天一次)给药有利于回避反应的获得过程。[5]

激酶实验

谷氨酸释放测定:

海马切片(400 μM)使用标准技术从豚鼠大脑中制备。切片在一对银电极上(10 Hz，5 V，0.1 ms持续时间) 固定10分钟，间隔为1分钟，然后淹没在1 mL标准人造脑脊液中(ACSF) (以mM为单位: 125 mM NaCl，5 mM KCl，1.24 mM KH2PO4，1.3 mM MgSO4，2 mM CaCl2，26 mM NaHCO3，和10 mM 葡萄糖)，充入95% O2和5% CO2，置于36 °C ，tetrodotoxin (TTX) (0.5 μM)存在或不存在下进行培养。在不同的实验设定中，α-银环蛇毒素(50 nM) 或美加明(3 μM)存在或不存在下，对Nefiracetam (1 μM)处理的脑片进行电刺激。将100μL微孔过滤器(0.45 μM)过滤的等份培养基注射到自动分析仪的离子交换柱上，以分离氨基酸，释放的谷氨酸盐的量使用已知氨基酸标准浓度计算。

细胞实验

Cell lines: 卵母细胞

Concentrations: ~1 μM

Incubation Time: 24 小时 - 48 小时

Method: 培养24到48小时后，将注入的卵母细胞转移到记录槽，并且于室温下(20到22 °C)在标准青蛙Ringer溶液中(115 mM NaCl，2 mM KCl，1.8 mM CaCl2，和5 mM HEPES，pH 7.0)持续灌流。无Ca2+的细胞外溶液由115 mM NaCl，2 mM KCl，5 mM MgCl2，5 mM HEPES，和1 mM EGTA，pH 7.0组成。为除去毒蕈碱Ach受体的作用，将1 μM阿托品加入细胞外溶液。Ach激活的电流使用两个电极的电压钳技术记录。电流使用pClamp软件在微型计算机上分析。Ach加入到卵母细胞。Nefiracetam以1 mM的浓度在蒸馏水中溶解作为原液，然后用细胞外溶液稀释为所需浓度。

(Only for Reference)

参考文献

[1] Shiotani T, et al. Brain Res, 2000, 859(2), 255-261.

[2] Yoshii M, et al. Brain Res, 1994, 642(1-2), 123-131.

[3] Nishizaki T, et al. Mol Pharmacol, 1998, 53(1), 1-5.

[4] Nishizaki T, et al. Brain Res Mol Brain Res, 2000, 80(1), 53-62.

[5] Sakurai T, et al. Jpn J Pharmacol, 1989, 50(1), 47-53.