产品描述

Dasatinib Monohydrate 是一种新型有效的多靶点抑制剂，作用于靶点Abl，Src 和 c-Kit，IC50分别为 <1 nM，0.8 nM 和 79 nM。

靶点（IC50 & Targe）

Abl,0.6nM

c-Kit (D816V),37nM

c-Kit (wt),79nM

EphA2,200nM(EC)

Src,0.8nM

体外研究

Dasatinib比imatinib更有效地抑制表达野生型Bcr-Abl 和Bcr-Abl突变体的Ba/F3细胞的增殖，T315I突变体除外。相对于imatinib，Dasatinib具有双对数(∼325倍)增加的效能。Dasatinib有效抑制野生型Abl激酶和除T315I外小范围的所有突变体。Dasatinib直接靶向作用于所有突变型Abl激酶域，并以浓度依赖的方式抑制自身磷酸化和底物磷酸化。与imatinib相比，Dasatinib对表达野生型Bcr-Abl的细胞表现出325倍的效能。[1] TgE骨髓细胞集落百分数在未处理的孔中为100%，在Dasatinib处理的孔中降低为4.12%。在Dasatinib存在下，WT和TgE骨髓细胞形成的集落百分比在统计学上具有显著差异。LMP2A的表达能够促进B淋巴细胞存活和增殖，这能够被以Lyn 和/或c-Abl激酶为靶点的Dasatinib抑制。[3] Dasatinib治疗抑制一部分甲状腺癌细胞中Src信号，减少生长，并诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡。以逐渐增加剂量的纳摩尔级浓度的Dasatinib (0.019 μM到1.25 μM)治疗3天，抑制大约50%的C643，TPC1，BCPAP，和SW1736细胞系生长，而抑制K1细胞系的生长需要更高浓度。10 nM 或50 nM Dasatinib治疗导致BCPAP ，SW1736和 K1细胞中G1期细胞增加9-22%，而S期细胞相应减少7-18%。[4]

体内研究

Dasatinib逆转LMP2A/MYC双重转基因小鼠体内的脾肿大。在TgE 小鼠体内，Dasatinib特异性防止LMP2A表达的骨髓B细胞形成集落，并减少脾脏大小。与对照组相比，Dasatinib治疗的Tg6/λ-MYC小鼠中，脾脏肿块显著减小。Dasatinib抑制LMP2A/MYC双重转基因小鼠体内的淋巴结肿大。从LMP2A/MYC双重转基因小鼠移植肿瘤细胞的Rag1KO小鼠体内，Dasatinib逆转脾肿大。Dasatinib治疗抑制表达LMP2A的B淋巴肿瘤细胞中Lyn磷酸化。[3]

激酶实验

激酶自磷酸化测定:

激酶试验使用野生型和突变型谷胱甘肽S转移酶(GST)-Abl融合蛋白(c-Abl 氨基酸220-498)进行。GST-Abl在使用前从谷胱甘肽-琼脂糖珠中释放；ATP浓度为5 μM。在用于激酶磷酸化和体外多肽底物磷酸化试验之前，GST-Abl激酶域融合蛋白立即用LAR酪氨酸磷酸酶处理。在30℃下培养1小时后，LAR磷酸酶通过加入钒酸钠(1 mM)灭活。比较未处理的GST-Abl激酶和去磷酸化的GST-Abl激酶，免疫印记分析按照常规进行，使用磷酸酪氨酸特异性抗体4G10以确定酪氨酸残基完全去磷酸化(>95%)，使用c-Abl抗体CST 2862确定GST-Abl激酶等量加入。对于突变型T315I，Dasatinib浓度范围扩展到1,000 nM。这些同样的抑制剂浓度用于体外多肽底物磷酸化试验。测试三个抑制剂在相同浓度范围内对GST-Src 激酶和GST-Lyn激酶的抑制作用。

细胞实验

Cell lines: Ba/F3 细胞系

Concentrations: ~32 nM

Incubation Time: 72小时

Method: Ba/F3细胞系以一式三份接种，并与逐渐增加浓度的Dasatinib培养72小时。使用基于甲烷硫代磺酸盐的活性试验测量增殖。IC50和IC90值以重复四次的三个独立实验平均值确定。抑制剂浓度范围为0 nM到32 nM (Dasatinib)。对于突变型T315I，Dasatinib浓度范围扩展到200 nM。

(Only for Reference)

动物实验

Animal Models: EμLMP2A (TgE和Tg6菌株)，MYC (λ-MYC)，和LMP2A/λ-MYC 双重转基因小鼠(Tg6/λ-MYC)

Formulation: DMSO

Dosages: 30 mg/kg

Administration: 腹腔注射给药

(Only for Reference)

参考文献

[1] O'Hare T, et al. Cancer Res. 2005, 65(11), 4500-4505.

[2] Shah NP, et al. Blood, 2006, 108(1), 286-291.

[3] Chan CM, et al. Clin Cancer Res. 2012, 18(13), 3580-3591.

[4] Dargart JL, et al. Antiviral Res. 2012, 95(1), 49-56.