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土壤酸性转化酶(S-AI)测试盒(微量法)
土壤酸性转化酶(S-AI)测试盒(微量法)图片
货号: SSAI-1-Y
包装: 100管/48样
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货号:SSAI-1-Y
产品介绍

正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

S-AI在 pH为 4.5~5.0(酸性)条件下催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖,是土壤微生物蔗糖代谢关键酶之一。

测定原理:

S-AI催化蔗糖降解产生还原糖,进一步与 3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在 510nm有特征光吸收,在一定范围内 510nm光吸收增加速率与 AI活性成正比。

自备用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体 50mL×1瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入 25mL试剂一充分溶解备用;用不完的试剂 4℃保存;

试剂三:液体 10mL×1瓶,4℃保存;

样品处理:

新鲜土样自然风干或 37度烘箱风干,过 30~50目筛。

测定步骤和加样表:

试剂名称(μL)测定管对照管
风干土样(g)0.050.05
试剂一
400
试剂二400

混匀, 37℃准确水浴 30min后,95℃水浴 10min(盖紧,以防水分散失),流水冷却后充分混匀(以保证浓度不变),10000g 25℃离心 10min,取上清液

上清液

200200
试剂三100100

混匀,95℃水浴 10min(盖紧,以防止水分散失),流水冷却后充分混匀, 510nm处,记录各管吸光值 A,如果吸光值大于 2,可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式中乘以相应稀释倍数),ΔA=A测定-A对照。

S-AI活性计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0016x -0.001;x为标准品浓度(μg/mL),y为吸光值。

单位的定义:每天每 g土样中产生 1mg还原糖定义为一个 S-AI活力单位。

S-AI活力(mg/d/g土样)=[(ΔA +0.001)÷0.0016×V反总÷W÷T÷1000=240×(ΔA+0.001)

V反总:反应体系总体积:0.4mL;T:反应时间,1/48d; W:样本质量,0.05g;1mg=1000μg。

b.用 96孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0008x -0.001;x为标准品浓度(μg/mL),y为吸光值。

单位的定义:每天每 g土样中产生 1mg还原糖定义为一个 S-AI活力单位。

S-AI活力(mg/d/g土样)=[(ΔA +0.001)÷0.0008×V反总÷W÷T÷1000=480×(ΔA+0.001)

V反总:反应体系总体积:0.4mL;T:反应时间,1/48d; W:样本质量,0.05g;1mg=1000μg。

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